蜂蜜对细胞因子的调控作用！

蜂蜜对细胞因子的调控作用！

　　蜂蜜是地球上现存的最古老的食物之一，不仅可以食用、营养美味，而且不会变质。早在20世纪初，研究者就发现蜂蜜具有促进伤口愈合的功效。随着1940年抗生素的诞生，蜂蜜的这一应用逐渐减少。然而，随着近年来抗生素滥用引起的细菌耐药现象的不断出现，蜂蜜促进创伤愈合的作用再次被世人重视。

　　蜂蜜有着广谱的抗菌作用，这种抗菌作用是蜂蜜在促进伤口快速愈合方面独有的优势。过去几十年，蜂蜜的抗菌活性被广泛研究。Majtan等研究发现，防御素-1是蜂蜜中主要的抗菌因子，不同花粉来源的蜂蜜其含量有着很大的不同。Kwakman等则发现，某些蜂蜜中植物素的含量明显高于其他花粉来源的蜂蜜，而这些蜂蜜的抗菌能力似乎更强。

　　许多具有抗菌活性的蜂蜜，如新西兰的麦卢卡蜂蜜、荷兰的RS蜂蜜已经被列为“医疗级蜂蜜”，并已用于临床。除防御素、植物素等抗菌成分外，蜂蜜中还含有蜜蜂来源或植物来源的免疫调节成分，同样可以促进伤口或溃疡的愈合。

　　皮肤覆盖全身，它使体内各种组织和器官免受物理性、机械性、化学性和病原微生物性的侵袭。皮肤具有两个方面的屏障作用：一方面防止体内水分、电解质、其他物质丢失;另一方面阻止外界有害物质的侵入。皮肤受损后，多种免疫细胞被激活，其中最主要的即巨噬细胞，具有强大的吞噬作用和抗原递呈作用。皮肤中的巨噬细胞主要由外周血液中的单核细胞演变而来。当皮肤受损后，单核细胞透过血管壁并释放酶类裂解细胞外基质蛋白，随后迁往皮肤创面。巨噬细胞可以通过经典途径(即脂多糖和干扰素-γ)被激活，也可被IL-4和IL-13激活。由脂多糖激活的巨噬细胞能够合成并分泌炎性介质，包括TNF-α、NO和IL-6。而IL-4或IL-13激活的巨噬细胞则在促进创面肉芽组织生长、促进血管生成方面起到重要作用。此外，巨噬细胞尚可分泌多种其他细胞因子和生长因子，促进新鲜毛细血管的生长、胶原合成及纤维化。

　　近年来，为了探究蜂蜜促进创面愈合方面的分子机制，巨噬细胞或单核细胞逐渐发展为一种较为成熟的用来监测和验证蜂蜜中免疫调节因子活性的实验模型。Tonks等认为蜂蜜之所以可以促进创面愈合，其机制就在于创周单核-吞噬细胞分泌促炎因子，调控炎性反应。

　　研究发现，用1%(w/v)的麦芦卡蜂蜜或蜂王浆孵化后，单核细胞系MM6(MonoMac6)及人外周单核细胞能释放细胞因子，显示出较强的免疫调控作用。与普通糖水(人造蜂蜜)相比较，各种类型的蜂蜜都可诱导并刺激MM6、人外周血单核细胞分泌TNF-α、IL-1β及IL-6。这其中尤以蜂王浆的效应最强。

　　研究人员同时指出，蜂蜜中虽存在浓度为56～690pg/ml的浓缩内毒素，但其不良反应基本可以忽略不计，而蜂蜜对MM6的刺激作用与内毒素并无关系。值得注意的是，MM6细胞对内毒素很敏感，蜂蜜中的内毒素可能对MM6起作用。内毒素又称“热源”，其化学成分有磷脂多糖-蛋白质复合物，其毒性成分主要为类脂质A，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等;多黏菌素B可拮抗内毒素对机体的危害作用。低至3.1pg/ml的内毒素即可对MM6产生刺激作用，而100pg/ml的内毒素将刺激MM6细胞释放大量的IL-6。

　　Timm等曾比较了4种不同蜂蜜(含麦卢卡蜂蜜)刺激MM6细胞产生促炎因子IL-6的能力，结果显示18h后，天然蜂蜜刺激产生IL-6的量最大。他们认为蜂蜜中具有免疫调控作用的成分具有以下特点：①耐热;②相对分子质量非常大(>20kDa);③多黏菌素B(具有内毒素拮抗活性)可破坏蜂蜜的免疫调控作用。这些特点与内毒素完全相符。然而，Tonks等则认为蜂蜜被加热以后，其刺激MM6细胞分泌细胞因子的活性大大下降;而且即便在多黏菌素B存在的情况下，蜂蜜刺激MM6细胞产生细胞因子的作用依然能被观察到。

　　Gannabathula等也做了类似研究，对新西兰蜂蜜刺激单核细胞系THP-1和U937产生TNF-α的作用进行了观察和对比。很多天然多肽、天然蛋白都有非特异性的免疫调控作用。一般认为，这种免疫调控作用的生物学机制即上述天然多肽或蛋白可特异性结合靶细胞表面的特定受体，激活下游的细胞信号转导通路，最终影响免疫因子的合成和分泌。业已证明，糖基化蛋白即具有诱导巨噬细胞分泌TNF-α的能力，而TNF-α可介导组织损伤的修复。

　　Majtan等研究发现，天然合金欢蜂蜜可刺激鼠类巨噬细胞产生TNF-α，而去蛋白的蜂蜜则无此作用，这表明蜂蜜中起免疫调控作用的可能是其蛋白成分(主要为55kDa的蜂王浆糖蛋白)。进一步的研究发现，蜂王浆糖蛋白经过适当的解朊消化后，其免疫调节作用更强;蜂王浆蛋白的N末端结构域才是免疫调控的核心部分。因此，可以推测蜂蜜中的内毒素可能在单核-吞噬细胞的激活过程中起重要作用。

　　另外，Majtan等发现，原代培养的表皮角化细胞在浓度为25μg/ml的蜂王浆糖蛋白的刺激作用下，产生TNF-αmRNA的量是原来的两倍。在蜂王浆糖蛋白作用下，人角化细胞产生IL-1β和转化生长因子-β(TGF-β)的量也成倍增加。蜂蜜中另一免疫调控蛋白是Ⅱ型阿拉伯半乳糖蛋白，分子质量为110kDa，可刺激单核细胞系THP-1和U937产生TNF-α。

　　经过γ射线照射消毒后，蜂蜜中的动植物成分如细菌孢子等均失去活性，但内毒素的分子结构保持不变，此时蜂蜜仍然具有免疫调控作用。因此，虽然蜂蜜中有很多天然的动植物成分，有研究者推测，真正起免疫调控作用的还是其中的内毒素。内毒素是革兰阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖(LPSs)。其分子结构包括亲水的多聚糖部分和疏水的类脂质A。内毒素刺激巨噬细胞产生促炎因子，而这些细胞因子在生理状况下受到严密地调控，因为过量的细胞因子会通过级联放大效应诱发机体炎性反应，甚至导致严重的败血症性休克。