蜂胶液中总黄酮含量测定方法的改进

总黄酮含量作为类保健品的功效含有，是蜂胶液中间体和成品的重要指标，对它的有效控制可直接反映出产品质量。根据实验者的发现，总黄酮的测定用的芦丁对照品溶液（精密称取芦丁对照品适量，约含芦丁200mg，置250ml容量瓶中，加甲醇175ml

，置水浴上微热溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得）这一段时间内有析出现象，摇匀后即出现浑浊，因此只能即配即用，在一定程度上造成对照品的浪费和检查时间的延误。对此我们对芦丁对照品溶液的制备方法进行了合理的改进，得出多组数据，进行统计分析，证明改进后的方法能更好地适用于样品检测。

1、仪器与试剂

1.1仪器

6010型紫外-可见光分光光度计（惠普伤害分析仪器厂）；GKCR112型可控硅控温水浴锅（南通沪通实验仪器厂）；AE-240型电子天平（梅特勒托利多）。

1.2试剂

水为纯化水，甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯。芦丁对照品（中国制剂品生物制品检验所）

1.3样品

蜂胶液（批号：070514）南京老山制剂业股份有限公司生产。

2、方法

2.1两种对照品溶液的制备方法

改进前（方法一）：精密称取芦丁对照品适量（约含芦丁200mg，置250ml容量瓶中，加甲醇175ml，置水浴上微热溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25ml，置100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。（每毫升含无水芦丁0.2mg））。

改进后（方法二）：精密称取芦丁对照品适量约含芦丁40mg，置200ml容量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。每毫升含无水芦丁0.2mg。

2.2对照品标准曲线的制备与测定

精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于50ml容量瓶中，各加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，混匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀。立即用紫外分光光度法计在510mm的波长处测定吸收度，以吸收度为横坐标，浓度或毫克数为纵坐标，计算回归方程。

2.3样品的制备与测定

精密量取蜂胶液1ml，置于50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。再精密量取1ml，置于50ml容量瓶中，照标准曲线绘制项下的方法，自加水至5ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀。。。起依法测定吸光度。

3、结果与分析

采用两种不同方法对芦丁对照品溶液进行配制，分别对同一批蜂胶液按标准操作规程规定的方法进行多次试验。根据其结果，对其进行方差分析，判断两种配制方法在检验结果上有无显著性差异。

3.1结果

样品检验结果见表1

表1样品检验结果单位：mg/ml

检验日期

方法一检验结果A1

方法二检验结果A2

（A1-Y）2

（A2-Y）2

2007.5.14

53.5

53.6

0.0784

0.1444

2007.5.21

52.4

53.4

0.6724

0.0324

2007.5.28

53.1

53.4

0.0144

0.0324

2007.6.4

53.3

52.7

0.0064

0.2704

2007.6.11

53.4

53.4

0.0324

0.0324

2007.6.19

52.4

53.2

0.6724

0.0004

2007.6.27

53.6

53.6

0.1444

0.1444

2007.7.5

52.4

52.4

0.6724

0.6724

2007.7.12

54.3

53.0

1.1664

0.0484

2007.7.19

54.3

53.0

1.1664

0.0484

平均值

Y1=53.27

Y2=53.17

总均值

Y=53.22

注1：方法一检验结果是使用改进前的对照品配制方法。

注2：方法二检验结果是使用改进后的对照品配制方法。

3.2结果评判

在一个因子两个水平A1和A2下（即选用两种不同配置方法的对照品），分别得到10组检验结果，假设其均值相等，取显著水平α=0.005，计算统计量F，判断结果有无显著性差异。如F＜F（1-α）（fa，fe）时则接受假设，两种配制方法所得的结果无显著性差异，说明改进后的标准品溶液能完全适用于蜂胶液总黄酮的测定；若F＜F（1-α）（fa，fe）时则拒绝假设，两种结果又显著性差异，说明改进后的标准品不适用于蜂胶液总黄酮的测定。

3.3统计分析

通过F实验，经计算F=0.15。

查表得F0.95（1，18）=4.41，得F＜F0.95（1，18），故接受假设，两者均值无显著性差异，说明改进后的标准品不适用于蜂胶液总黄酮的测定。

4、结论

（1）方法二制备的芦丁对照品标准溶液，放置一段时间后不出现沉淀现象。可以重复使用，且结果重现性好。

（2）用两种制备芦丁对照品溶液的方法检测蜂胶液中的总黄酮均值无显著差异，说明改进后的对照品溶液（方法二）能更准确有效地适用于蜂胶液总黄酮的测定。

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